सेल कल्चर के नियमित अवलोकन के तरीके और सावधानियां
सेल कल्चर के नियमित अवलोकन के तरीके और सावधानियां
कोशिकाओं को टीका या उपसंस्कृत होने के बाद, प्रयोगकर्ता को हर दिन या अधिकतम 1 ~ 2 दिनों में कोशिकाओं की नियमित जांच करनी चाहिए। कोशिकाओं के आकारिकी और वृद्धि के साथ-साथ संस्कृति के पीएच परिवर्तन का निरीक्षण करें, चाहे प्रदूषण हो, आदि। कोशिकाओं के गतिशील परिवर्तनों के अनुसार, द्रव प्रतिस्थापन या मार्ग उपचार करें। यदि असामान्य स्थितियां पाई जाती हैं, तो समय रहते उपाय करें।
1. अच्छी रूपात्मक विकास अवस्था वाली कोशिकाओं को सामान्य माइक्रोस्कोप के तहत बड़ी पारदर्शिता, मजबूत अपवर्तन और अस्पष्ट रूपरेखा के साथ देखा जा सकता है। जब कोशिकाएं खराब रूप से विकसित होती हैं, तो समोच्च बढ़ जाता है, रिक्तिकाएं, लिपिड बूंदें और अन्य कण अक्सर साइटोप्लाज्म में दिखाई देते हैं, कोशिकाओं के बीच का अंतर बढ़ जाता है, और कोशिका आकृति विज्ञान अनियमित होता है या यहां तक कि अपनी मूल विशेषताओं को खो देता है, जैसे कि उपकला कोशिकाएं उपकला बन जाती हैं। कोशिकाएं। जब कोशिकाएं मर जाती हैं, तो कुछ रंग विकृत कोशिका झिल्ली के माध्यम से विघटित परमाणु डीएनए के साथ जुड़ सकते हैं और उन्हें रंगीन बना सकते हैं। इसलिए, मृत और जीवित कोशिकाओं की पहचान करने के लिए अक्सर ट्रिपैन ब्लू का उपयोग किया जाता है। जीवित कोशिकाएं दागदार नहीं होती हैं, और मृत नाभिक नीले रंग के होते हैं।
2. प्राथमिक संस्कृति या उपसंस्कृत सेल निलंबन के टीकाकरण के बाद सेल की वृद्धि, यह विभिन्न ऊष्मायन अवधि के बाद बढ़ना शुरू कर दिया। पैसेज सेल लाइन, भ्रूण के ऊतक या लार्वा ऊतक आम तौर पर अगले दिन कोशिका वृद्धि देखते हैं और एक सप्ताह के भीतर टुकड़ों में जोड़ा जा सकता है। बोतल की दीवार पर टीका कोशिकाओं के बढ़ने के बाद, उन्हें समय पर फिर से सुसंस्कृत किया जाना चाहिए। अन्यथा, पोषक तत्वों की खपत और चयापचय संचय के कारण, कोशिकाएं रुकने या गिरावट की अवधि में प्रवेश करेंगी। इस समय, सेल समोच्च बढ़ाया जाता है, और दानेदार जमा अक्सर कोशिकाओं में दिखाई देते हैं, जो माइटोकॉन्ड्रिया में सूजन होती है। कोशिका द्रव्य रिक्त हो जाता है, और कोशिकाएँ गोल और खुरदरी हो जाती हैं। गंभीर मामलों में, कोशिकाएं बोतल की दीवार से गिर जाती हैं। केवल समय में उपसंस्कृति द्वारा ही कोशिकाएं बढ़ती और पुनरुत्पादन जारी रख सकती हैं।
3. सामान्य परिस्थितियों में, पोषक तत्व समाधान आड़ू लाल होता है। यदि कोशिकाओं को pH6.5 ~ 6.6 पर बनाए रखा जाता है, तो कोशिकाएं गिरकर मर जाएंगी। जब संस्कृति माध्यम अम्लीकृत हो जाता है और पीला हो जाता है, तो यह इंगित करता है कि संस्कृति माध्यम में मेटाबोलाइट्स एक निश्चित मात्रा में जमा हो गए हैं, और ताजा संस्कृति माध्यम को बदलने की आवश्यकता है। यदि HEPES को संस्कृति माध्यम में जोड़ा जाता है या 5% co2 इनक्यूबेटर में सुसंस्कृत किया जाता है, तो पीएच को अपेक्षाकृत स्थिर रखा जा सकता है। पोषक तत्व घोल बदलने का समय पोषक तत्वों की खपत पर निर्भर करता है। जब सेल तेजी से बढ़ता है, तो इसे हर 2 ~ 3 दिनों में बदला जा सकता है, और जब विकास धीमा होता है, तो इसे हर 3 ~ 4 दिनों में भी बदला जा सकता है। इस बात पर विशेष ध्यान दिया जाना चाहिए कि पीएच मान के लिए विभिन्न कोशिकाओं की अलग-अलग आवश्यकताएं होती हैं।
4. सुसंस्कृत सेल संस्कृति के माइक्रोबियल संदूषण के बाद माइक्रोबियल संदूषण, पीएच मान बदल जाएगा, और संस्कृति माध्यम अशांत दिखाई देगा। जीवाणु संक्रमण के बाद, जीवाणुओं की गति के कारण प्रकाश सूक्ष्मदर्शी के नीचे हल्का सा फ्लैश होता है; कवकीय संक्रमण में, सूक्ष्मदर्शी के नीचे कई फिलामेंटस हाइपहे और कभी-कभी गुच्छेदार बीजाणु देखे गए; माइकोप्लाज्मा संदूषण का पता केवल कुछ पता लगाने के तरीकों की मदद से लगाया जा सकता है। सेल संदूषण के बाद, इसे आम तौर पर त्याग दिया जाना चाहिए। महत्वपूर्ण सेल लाइनों के लिए, आप प्रदूषण को दूर करने के कुछ उपायों को पेश करने के लिए प्रासंगिक मोनोग्राफ का उल्लेख कर सकते हैं। महत्वपूर्ण प्रयोगों और कीमती कोशिकाओं की खेती और संचालन कम से कम दो प्रयोगकर्ताओं द्वारा स्वतंत्र रूप से या एक व्यक्ति द्वारा कई बार (अलग-अलग समय पर) किया जाना चाहिए। संस्कृति प्रयोगशाला की स्वच्छता स्थितियों के अलावा, हवा में आर्द्रता सूक्ष्म रूप से माइक्रोबियल प्रदूषण से संबंधित है। हवा की नमी कम होने पर शरद ऋतु और सर्दियों में महत्वपूर्ण और दीर्घकालिक प्रयोग किए जाने चाहिए।
अन्य सावधानियां:
सबसे पहले, सेल की स्थिति निर्धारित करने के लिए बार-बार निरीक्षण करें।
दूसरा, एंटीबायोटिक्स जोड़ना है या नहीं। यह स्थिति पर निर्भर करता है। सेल कल्चर की प्रक्रिया में, यथासंभव कुछ अप्रासंगिक अशुद्धियों को जोड़ना आवश्यक है। एंटीबायोटिक्स भी कोशिकाओं के लिए एक बोझ हैं।
तीसरा, भ्रूण गोजातीय सीरम का विगलन। सीरम को आम तौर पर -20 ℃ में संग्रहीत किया जाता है और रेफ्रिजरेटर में 4 ℃ (4 ) पर गल जाता है, जिसमें एक लंबा समय लगता है और एक दिन पहले गल जाने की आवश्यकता होती है।