कोशिका संवर्धन के पर्यावरणीय कारक
कोशिका संवर्धन के पर्यावरणीय कारक
1. बाँझ वातावरण
इन विट्रो में सेल कल्चर के लिए गैर-विषाक्तता और बाँझपन प्राथमिक स्थितियां हैं। विवो में, विषहरण प्रणाली और कोशिकाओं की प्रतिरक्षा प्रणाली सूक्ष्मजीवों या अन्य हानिकारक पदार्थों के आक्रमण का विरोध कर सकती है। हालांकि, इन विट्रो कल्चर की प्रक्रिया में, कोशिकाओं में शरीर की प्रतिरक्षा प्रणाली की सुरक्षा की कमी होती है और सूक्ष्मजीवों की रक्षा करने और हानिकारक पदार्थों को डिटॉक्सीफाई करने की क्षमता खो देती है। यह सुनिश्चित करने के लिए कि कोशिकाएं इन विट्रो में विकसित और पुन: उत्पन्न हो सकती हैं, बाँझ कार्य क्षेत्रों, अच्छी व्यक्तिगत स्वच्छता, बाँझ अभिकर्मकों और संस्कृति मीडिया, और बाँझ संचालन को सुनिश्चित करना आवश्यक है।
सामान्य माइक्रोबियल प्रदूषण में माइकोप्लाज्मा, बैक्टीरिया और कवक शामिल हैं। माइकोप्लाज्मा में कोई घातक विषाक्तता नहीं होती है, यह लंबे समय तक कोशिकाओं के साथ सह-अस्तित्व में रह सकता है, और कोशिकाओं पर संभावित प्रभाव डालता है। हालांकि, यह छोटा और पहचानने में मुश्किल है। इसका पता लाइकेन रेड या होचस्ट 33342 स्टेनिंग से लगाया जा सकता है। बैक्टीरिया तेजी से फैलता है और थोड़े समय में बड़ी मात्रा में फैल सकता है, और कोशिकाओं को मारने के लिए विषाक्त पदार्थों का उत्पादन कर सकता है। कवक कई प्रकार के होते हैं, जिन्हें नग्न आंखों से देखा जा सकता है। वे संस्कृति तरल सतह पर तैरते हैं और फिलामेंटस, ट्यूबलर या डेंड्रिटिक हो सकते हैं।
2. उचित तापमान
आम तौर पर, स्तनधारी और एवियन कोशिकाओं को इन विट्रो में संवर्धित करने के लिए उपयुक्त तापमान 37-38 ℃ है, और अनुचित पर्यावरणीय तापमान कोशिकाओं के विकास को प्रभावित करेगा। निम्न तापमान के प्रति सेल की सहनशीलता उच्च तापमान की तुलना में अधिक मजबूत होती है। कम तापमान पर, कोशिका की चयापचय गतिविधि और परमाणु विभाजन क्षमता कम हो जाती है। यदि तापमान 0 ℃ से कम नहीं है, तो सेल चयापचय प्रभावित होता है, लेकिन कोई नुकसान नहीं होता है; 25 ~ 35 ℃ पर, कोशिकाएं धीरे-धीरे बढ़ीं; हालांकि, अगर इसे कई घंटों के लिए 40 ℃ पर रखा जाता है, तो यह कोशिकाओं के अस्तित्व और विकास के लिए अनुकूल नहीं है, और यहां तक कि उनकी मृत्यु भी हो सकती है।
3. उपयुक्त आसमाटिक दबाव
हाइपरटोनिक घोल या हाइपोटोनिक घोल से कोशिकाओं में झुर्रियाँ, सूजन और टूटना हो सकता है। इसलिए, आसमाटिक दबाव इन विट्रो में सेल संस्कृति के लिए महत्वपूर्ण स्थितियों में से एक है। इन विट्रो में संवर्धित अधिकांश कोशिकाओं में आसमाटिक दबाव के प्रति एक निश्चित सहनशीलता होती है। व्यावहारिक अनुप्रयोग में, अधिकांश कोशिकाओं पर 260-320mmol / l का आसमाटिक दबाव लागू किया जा सकता है।
4. गैस पर्यावरण और पीएच
कोशिकाओं के इन विट्रो कल्चर के लिए एक आदर्श गैस वातावरण की आवश्यकता होती है, और ऑक्सीजन और कार्बन डाइऑक्साइड कोशिका के अस्तित्व के लिए आवश्यक शर्तें हैं। ऑक्सीजन कोशिकाओं के ट्राइकारबॉक्सिलिक एसिड चक्र में भाग लेता है और कोशिका अस्तित्व, चयापचय और संश्लेषण के लिए ऊर्जा प्रदान करता है; कार्बन डाइऑक्साइड न केवल कोशिकाओं का चयापचय उत्पाद है, बल्कि कोशिका वृद्धि का एक आवश्यक घटक भी है, और यह संस्कृति माध्यम के पीएच को बनाए रखने से भी संबंधित है। अधिकांश कोशिकाओं के लिए उपयुक्त पीएच श्रेणी आमतौर पर 7.2-7.4 है। खुली संस्कृति में, 5% कार्बन डाइऑक्साइड सबसे अच्छा था।